ELISpot在mRNA疫苗开发中的应用

　　早在2003年发布的《预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则》中指出“在评价细胞免疫效价时，应当建立检测评价细胞免疫的方法（如特异性CTL反应的方法或Elispot方法等）”。而2020年CDE发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究》指导原则中也强调了mRNA疫苗的质量研究需要进行体内效力试验，推荐使用ELISpot技术检测评价mRNA疫苗的细胞免疫反应。

ELISpot在mRNA疫苗开发中有以下几个方面的应用：

1、研发阶段：

• 筛选优化mRNA序列和载体：不同的mRNA序列和载体可能会影响mRNA在细胞内的稳定性、转录效率和免疫原性。通过ELISpot可以评价不同的mRNA序列和载体对细胞分泌目标抗原蛋白或其他蛋白的影响，从而选择最佳的方案。

• 评价mRNA表达抗原蛋白的免疫原性：通过ELISpot可以检测mRNA表达抗原蛋白能否诱导特异性抗体或细胞因子的分泌，从而反映出mRNA表达抗原蛋白对体液免疫和细胞免疫的刺激程度和持久性。

• 评价mRNA本身的免疫原性：未经修饰的mRNA可能会被机体识别为外来入侵物，并引发强烈的先天免疫反应，导致发炎和细胞死亡。通过ELISpot可以检测mRNA本身是否会诱导细胞分泌TNF-α等炎症因子，从而评价mRNA本身的免疫原性和安全性。

2、临床阶段：

• 评价mRNA疫苗的保护效果：通过ELISpot可以检测mRNA疫苗接种后，机体是否能够产生针对特定病原体的抗体或细胞因子，从而评价mRNA疫苗的保护效果。例如，辉瑞/拜恩泰和莫德纳的新冠肺炎mRNA疫苗都是利用编码新冠病毒刺突蛋白的mRNA，通过ELISpot可以检测接种者是否能够产生针对刺突蛋白的中和抗体或IFN-γ等细胞因子。